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病理检测

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特殊染色
ROS染色
周期:.
规格:片
货号:PR-004177
单位:.
价格:询价
品牌:行一生物

 服务介绍

ROS染色原理是利用荧光探针(如Dihydroethidium,DHE)检测细胞内活性氧(ROS)的水平。ROS主要包括超氧阴离子自由基、过氧化氢、羟自由基等。这些活性氧分子在细胞内参与多种生理和病理过程。在病理条件下,由于活性氧的产生和清除失去了正常平衡,会对组织细胞造成损伤。二氢乙锭(Dihydroethidium,DHE),可自由透过活细胞进入细胞内,并被细胞内的ROS氧化,形成氧化乙锭;氧化乙锭可掺入染色体DNA中,产生红色荧光。根据活细胞中红色荧光的产生,可以判断细胞ROS含量的多少和变化。检测ROS水平常用于凋亡、衰老、自噬、炎症、缺血再灌注损伤、神经退行疾病等领域的研究。ROS染色是活氧检测,组织冰冻切片不能用固定液固定,最好是新鲜组织,ROS阴性细胞仅有较低的荧光强度,ROS阳性细胞有较强的红色荧光。


 实验器材及主要实验试剂

实验器材

主要实验试剂

 实验步骤

1.冰冻切片固定:切片于4%多聚甲醛固定5min,蒸馏水洗1min;PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
2.冰冻切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴加ROS染液(取1mgDihydroethidium于3.1mLDMSO中,得到1mMDihydroethidium),避光恒温箱37℃孵育30min。
3.DAPI复染细胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min。
4.封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
5.镜检拍照:切片于荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm;FITC绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555nm;CY3红光激发波长510-560,发射波长590nm)。

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