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实验服务

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分子互作实验
双荧光素酶检测-miRNA-靶基因验证
周期:.
规格:.
货号:PR-003413
单位:套
价格:询价
品牌:载基生物

 服务介绍
      双荧光素酶检测利用两种不同的荧光素酶(如萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶)的相对表达量来检测特定基因的活性。通过比较实验组和对照组中两种荧光素酶的发光强度,可以准确评估靶基因的表达水平或启动子的活性。

①双荧光素酶-靶基因检测:在双荧光素酶系统中,通常将目标基因的调控序列(如启动子)与萤火虫荧光素酶基因连接在一起。当目标基因被激活时,萤火虫荧光素酶会发出荧光,从而实现靶基因的检测。

②双荧光素酶-启动子检测:通过将感兴趣的启动子序列克隆到荧光素酶报告基因的上游,检测启动子的活性。不同条件下启动子活性的变化可以通过荧光强度的变化来反映,从而研究基因表达的调控机制。


 载基服务优势

实验优势:①免费、专业的结合分析;
                ②丰富的载体选择,免费提供293T作为工具细胞;
                ③快速的克隆构建;
                ④完善的配套细胞学验证。


 实验步骤
1.酶标仪先开起来预热。
2.
小心吸弃培养液,PBS洗一次。
3.5x的细胞裂解液用PBS稀释成1x,500ul/孔,摇匀后室温静置10min,直到细胞全部裂解
下来。
4.
底物配置:萤火虫:干粉+稀释液,混匀后直接使用,100ul/孔。海肾:50x的原液用稀释液稀释成1x,100ul/孔。每个样本3个复孔,空白对照3个复孔,例6个样本,要配(6*3)+3=21个孔,多配2孔的量避免加样过程的消耗,也就是23孔*100ul=2300ul的萤火虫和海肾的量。配完这两个底物要避光保存。
5.
将裂解物吹打下来,收集到1.5ml的EP管中(避免气泡),12000g,5min离心,收集200ul的上清液到新管中。
6.
取出黑色96孔板,先加100ul的萤火虫底物到孔中,随后立即加入20ul的样本上清液(速度要快,不要有气泡),上机测萤火虫的值,保存数据。
7.
再叠加100ul海肾底物,上机测海肾的值,保存数据。

 产品目录表

发货标准:双荧光素酶检测原始数据、完整的实验报告和数据分析。
客户提供:靶基因、miRNA名称及种属进行评估和报价。


 结果示例

 实验交付



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