福州载基生物科技有限公司

免疫荧光(Immunofluorescence，IF)技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，将抗体分子与一些示踪标记结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位和定量。免疫荧光技术可以对目的蛋白在细胞中的定位提供更高的分辨率、更高的灵敏度，是目前在细胞水平进行蛋白量(定性为主)及蛋白定位分析最常用的方法。

载基可将玻璃切片上的所有信息进行采集形成高分辨率的数字切片，防止荧光淬灭；可任意倍数进行观察；可满足临床、科研、教学等多种用途。

▶ 载基优势

1.采用进口abcam、CST、Santa、omnimabs抗体；
2.光学显微镜和荧光显微镜齐全，一站式完成实验；
3.具有多年免疫荧光实验经验；
4.可免费使用我司细胞库、组织库已有细胞或石蜡切片，无需购买；
5.提供完整的实验数据及实验报告(包括实验仪器、试剂、方法步骤、结果、数据分析、结论等)。

客户提供：新鲜样本/固定后的样本/包埋后的蜡块/切片和一抗，新鲜样本干冰运输；固定液样本、蜡块常温运输；石蜡切片、组织芯片冰袋运输；冰冻切片冰袋+干冰运输；抗体冰袋运输；细胞爬片4%多聚甲醛固定15min后用无菌PBS洗涤后用无菌PBS浸泡，冰袋运输。

▶ 实验步骤

1.抗原修复：将 EDTA 抗原修复液（PH9.0）用蒸馏水稀释 50 倍，并加热至沸腾。将脱蜡水化后的切片置于耐高温染色架上，放入不锈钢锅中；将功率调至最小(处于保温状态)，盖上锅盖，继续加热 20 分钟后，离开热源，自然冷却 10 分钟；用自来水冲淋不锈钢锅外壁使之冷却，待锅中液体冷却至室温后取出切片;蒸馏水冲洗 3 分钟 x3 次；用 PBS 溶液冲洗 3 分钟 x3 次；
2.灭活：除去 PBS，在切片上滴加内源性过氧化物酶阻断剂，室温下孵育 10 分钟，用PBS 溶液冲洗 3 分钟 x3 次；
3.封闭：除去 PBS，在切片上滴加 5%BSA 封闭液室温下孵育 30min；
4.加一抗：轻轻甩掉封闭液，切片上滴加第一抗体，4 度孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）；
5.加二抗：取出湿盒，复温 40min 左右，用 PBS 溶液冲洗 3 分钟 x3 次，除去 PBS，切片上滴加与一抗相应种属的荧光二抗，室温下避光孵育 1h，PBS 冲洗 3x3 分钟；
6.DAPI 复染细胞核：除去 PBS,切片稍甩干后在圈内滴加 DAPI 染液，避光室温孵育10min，PBS 冲洗 3x3 分钟
7.淬灭组织自发荧光：除去 PBS，在圈内加入自发荧光淬灭剂避光室温孵育 5min，流水冲洗 10min；
8.封片：切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片；
9.镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。（DAPI 紫外激发波长 330-380nm，发射波长 420nm，发蓝光；FITC 激发波长 465-495nm，发射波长 515-555 nm，发绿光；CY3 激发波长 510-560，发射波长 590nm，发红光。
10.结果观察：DAPI 染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光或绿光。